Полная версия

Главная arrow Медицина arrow Enterobacteria как возбудители кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных

  • Увеличить шрифт
  • Уменьшить шрифт


<<   СОДЕРЖАНИЕ   >>

Питательные среды для культивирования энтеробактерий

Консервирующие смеси

Консервирующие смеси используют при отсутствии необходимых условий и сред для посева в течение 3-4 ч с момента взятия материала. Объем консервирующей смеси должен составлять 2/з от объема, взятого для исследования материала.

Глицериновая смесь. Смешивают 1000 мл изотонического раствора хлорида натрия и 500 мл глицерина, затем добавляют 20 %-ный раствор фосфорнокислого натрия (Na2HP04) в таком количестве, чтобы рН смеси соответствовал 7,8--8,0. Смесь стерилизуют текучим паром 3 дня по 30 мин.

Фосфатная буферная смесь. В 1000 мл дистиллированной воды растворяют 0,45 г фосфата калия однозамещенного (КН2Р04) и 5,34 г фосфата натрия двузамещенного выветренного (NajHP04). Стерилизуют 30 мин при 121 ° С.

Боратно-буферный раствор. Смешивают 57 г кристаллической буры, 84 г борной кислоты, 99 г хлорида натрия. Затем 20 г полученной смеси растворяют в 1000 мл дистиллированной воды. Стерилизуют 10 мин при 121°С.

Среды обогащения

Желчный бульон. Применяют в качестве среды обогащения для сальмонелл, выделяемых из крови или материалов, не содержащих или содержащих в незначительных количествах другие виды бактерий.

Желчь крупного рогатого скота наливают в колбу и нагревают 1 ч текучим паром. После отстаивания фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют текучим паром 3 дня по 30 мин. К 800 мл МПБ добавляют 200 мл желчи, разливают по пробиркам и стерилизуют текучим паром 3 дня по 30 мин.

Среда Мюллера. Используют для накопления сальмонелл.

К 4,5 г простерилизованного сухим жаром химически чистого мела (СаССц) добавляют 90 мл МПБ или бульона Хоттингера и стерилизуют 30 мин при 121°С. Перед посевом к бульону с мелом асептически добавляют 2 мл раствора Люголя (иодид калия - 25 г, иод кристаллический - 20 г, вода дистиллированная - до 100 мл) и 10 мл раствора тиосульфата натрия (тиосульфат натрия - 50 т, вода дистиллированная -- до 100 мл). Смесь перемешивают и разливают по пробиркам.

Среда Кауфмана. Используют для накопления сальмонелл.

К 100 мл стерильной среды Мюллера асептически добавляют 5 мл стерильной желчи (желчь стерилизуют дробно, текучим паром 3 дня подряд по 20 мин) и 5 мл 0,1 %-ного водного раствора бриллиантового зеленого. Разливают по пробиркам. Не стерилизуют.

Селенитовая среда. Используют для накопления сальмонелл. Для приготовления используют два раствора.

Раствор 1. К 950 мл раствора фосфатов (натрия гидрофосфат безводный -- 7 г, натрия дигидрофосфат безводный -- 3 г) на дистиллированной воде добавляют 5 г пептона и 4 г лактозы. Разливают во флаконы по 50 мл и стерилизуют текучим паром 2 дня подряд по 30 мин или 30 мин при 112°С. При приготовлении раствора количественное соотношение фосфатов подтитровывают, чтобы при добавлении пептона и селенита натрия готовая среда имела рН 6,9-7,1. Раствор хранят при 4-10°С 1-2 мес.

Раствор 2. 4 г натрия гидроселенита (NaHSe03) растворяют в 40мл стерильной дистиллированной воды. Раствор готовят непосредственно перед приготовлением среды.

В каждый флакон с 50 мл раствора 1 асептически добавляют 2 мл раствора 2, перемешивают и разливают по пробиркам.

Среда Киллиана. Используют для накопления сальмонелл.

К 100 мл стерильного МПБ или бульона Хоттингера (рН 6,7-6,9) непосредственно перед применением добавляют 1 мл ОД %-ного водного раствора бриллиантового зеленого.

Магниевая среда. Используют для накопления сальмонелл. Готовят два раствора.

Раствор 1. К 890 мл дистиллированной воды добавляют 4,2 г пептона, 7,15 г хлорида натрия, 1,43 г дигидрофосфата калия (КН2Р04) и 9 мл дрожжевого диализата.

Раствор 2. В 90 мл дистиллированной воды растворяют 35,7 г хлорида магния (MgCl2 * 6Н20).

Оба раствора смешивают и добавляют 0,9 мл 0,5 %-ного водного раствора бриллиантового зеленого. Разливают по пробиркам и стерилизуют 30 мин при 112°С.

Среда ЭТ-1 (Калина, 1975). Используют для накопления сальмонелл, эдвардсиелл.

К 1000 мл МПБ или бульона Хоттингера (рН 7,4-7,6) добавляют 2 г глюкозы и 2 мл 5 %-ного спиртового раствора розоловой кислоты. Смесь кипятят на водяной бане 15-20 мин, добавляют 25 000 ЕД полимиксина и асептически разливают по пробиркам.

Для приготовления 5 %-ного спиртового раствора розоловой кислоты 0,5 г розоловой кислоты растворяют в 10 мл спирта-ректификата, после чего добавляют 90 мл дистиллированной воды.

Среда Минка. Используют для накопления эшерихий, обладающих адгезивными антигенами.

Раствор 1 (фосфатный буферный раствор рН 7,5). Берут 1,36 г калия фосфорнокислого однозамещенного (КН2Р04), 10,1 г натрия фосфорнокислого двузамещенного (Na2HP04 * 7Н20) и растворяют в дистиллированной воде до конечного объема 1000 мл. Стерилизуют 30 мин при 115°С.

Раствор 2. 10 г сульфата магния (MgS04 * 7Н20)] г хлорида марганца (МпС12 * 4Н20), 0,135 г хлорного железа (РеС13 * 6Н20) и 0,4 г хлорида кальция (СаС12 * Н20) растворяют в дистиллированной воде до конечного объема 1000 мл. Стерилизуют 30 мин при 115 °С.

Раствор 3. 5 мл гидролизата лактальбумина (или ферментативного казеиново-дрожжевого гидролизата) растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Стерилизуют текучим паром 3 дня по 30 мин.

Раствор 4. 5 г глюкозы растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Стерилизуют текучим паром 3 дня по 30 мин.

Раствор 5. 26 г агара "Дифко" растворяют в 1000 мл дистиллированной воды. Стерилизуют 30 мин при 115 °С.

Полученные растворы асептически соединяют в следующем соотношении: раствор 1 -- 500 мл, раствор 2 -- 1 мл, раствор 3 -- 20 мл при 50°С, раствор 4-20 мл, раствор 5 - 460 мл при 50 "С.

Среда П-1 (Калина, 1975). Используют для накопления протеев.

В 1000 мл стерильного бульона Хоттингера растворяют 1 г маннита, 5 г желчных солей по Олькеницкому, 0,8 г дигидрофосфата калия (КН2РО4), 20 мл 0,01 %-ного водного раствора кристаллвиолета. Кипятят на водной бане 15--20 мин. Добавляют 10 мл 50 %-ного водного раствора мочевины и 1 000 000 ЕД полимиксина. Асептически разливают по пробиркам.

Приготовление желчных солей по Олькеницкому. К 1000 мл бычьей или свиной желчи добавляют 40 г гидроокиси натрия и автоклавируют 3 ч при 1,5 атм. Добавляют 100 мл 20 %-ного раствора хлорида бария (ВаС12 * 2Н20), автоклавируют 1 ч при 100°С и оставляют на 12-18 ч при комнатной температуре. Надосадочную жидкость сливают, фильтруют и добавляют 20 %-ный раствор соляной кислоты (до кислой реакции), оставляют на 12-16 ч при комнатной температуре. После этого сливают, промывают водой и добавляют 40 %-ный раствор гидроокиси натрия (до щелочной реакции). Полученный раствор солей высушивают при 115 °С.

Среда К-1 (Калина, 1980). Используют как селективную среду и для накопления клебсиелл.

В 1000 мл стерильной дистиллированной воды растворяют 5 г хлорид натрия, 0,2 г сульфата магния (MgS04 * 7Н20), 2 г дигидрофосфата калия (КН2РО4) , 2 г гидрофосфата калия (К2НРО4), 2 г рафинозы, 2 мл 1,6%-ного щелочного раствора бромтимолового синего, 20 мл 0,01 %-ного водного раствора кристаллвиолета. Кипятят 15-20 мин на водяной бане, добавляют 4 мл 50 %-ного раствора мочевины и асептически разливают по пробиркам.

Для приготовления 1,6 %-ного щелочного раствора бромтимолового синего в 80 мл дистиллированной воды растворяют 1,6 г бромтимолового синего и 20 мл 0,25 и. раствора гидроокиси натрия.

Среда Ворфеля - Ферпосона. Используют для лучшего образования капсулы у клебсиелл.

В 1000 мл дистиллированной воды растворяют 2 г хлорида натрия, г сульфата калия (K2S04), 0,25 г сульфата магния (MgS04 x х 7Н20), 20 г сахарозы, 88 мл дрожжевого экстракта (или 2 г сухого дрожжевого экстракта), фильтруют через бумажный фильтр, разливают по пробиркам и стерилизуют 15 мин при 121°С.

Бульон с 0,2 % глюкозы. Используется для лучшего образования у клебсиелл капсулы.

Берут 1000 мл МПБ или бульона Хоттингера (рН 7,2-7,4). В не-большом его объеме, нагретом до 40--50°С, растворяют 2 г глюкозы и смешивают с оставшимся бульоном. Разливают по пробиркам и стерилизуют 30 мин при 112 °С.

Среда Ющенко, Дунаева (1980). Используют для накопления иерсиний.

В 990 мл дистиллированной воды растворяют 8,5 г хлорида натрия, добавляют 3 мл 1/15 М раствора гидрофосфата натрия (Na2HP04 x х 12Н20) и 7 мл 1/15 М раствора дигидрофосфата калия (КН2Р04). Устанавливают рН 7,2, фильтруют, разливают по пробиркам и стерилизуют 10 мин при 116°С или 30 мин текучим паром.

 
Перейти к загрузке файла
<<   СОДЕРЖАНИЕ   >>